膠原酶II型(Collagenase, Type II)是一種具有獨(dú)特的消化天然膠原和變性膠原能力。去污劑、六氯環(huán)己烷和重金屬離子可降低酶活性。專一作用于原膠原,使其斷裂進(jìn)而被其他蛋白酶水解,不水解纖維蛋白,球蛋白。本產(chǎn)品來(lái)源于溶組織梭菌,為透析后的凍干粉末。
別名:Collagenase,Type 2;Clostridiopeptidase A;梭菌肽酶 A
物理性狀及指標(biāo)
外觀:………………………………………棕褐色或淡褐色粉末
溶解性:……………………………………TESCA buffer: soluble 1~2mg/mL at 37℃
units/mg Solid (Collagen) :………………≥125CDU/mg
units/mg Solid (Caseinase):……………≥200
units/mg Solid (Clostripain):……………≥3.5
units/mg Solid (Tryptic):……………….…≥0.1
注:TESCA buffe-50 mM TES, 0.36 mM Calcium chloride, pH 7.4
酶活定義(膠原蛋白)
一個(gè)單位是指在37℃、pH值為7.5的條件下,5小時(shí)內(nèi)能夠從膠原蛋白中釋放出相當(dāng)于1微摩爾L-亮氨酸的肽段。
儲(chǔ)存條件:-20℃保存,避光防潮密閉干燥
運(yùn)輸條件:濕冰運(yùn)輸(按季節(jié))
用途及描述:科研試劑,僅限應(yīng)用于分子生物學(xué)、藥理學(xué)等科研方面,嚴(yán)禁用于人體。
膠原酶II型可用于:
用于骨骼、心臟、肝臟、甲狀腺和唾液腺細(xì)胞的原代分離;
用于研究高級(jí)糖基化終產(chǎn)物(AGE)的動(dòng)脈組織;
與其他蛋白酶一起用于解剖人類腫瘤,小鼠腎臟,人腦,肺上皮和許多其他組織;
在肝臟和腎臟灌注研究,胰腺消化和非實(shí)質(zhì)肝細(xì)胞的分離;
用于從大鼠肝臟制備活肝細(xì)胞和從大鼠脂肪組織中分離脂肪細(xì)胞。
生物活性
每摩爾的膠原酶可以被4g鈣原子激活。它被乙二醇雙(β-氨基乙醚)- N, N, N, N -四乙酸、β-巰基乙醇、谷胱甘肽,巰基乙酸和8-羥基喹啉所抑制。膠原酶和中性蛋白酶在從組織中進(jìn)行細(xì)胞的有效釋放中起到重要作用。膠原酶識(shí)別序列-R-Pro-8-X-Gly-Pro-R-,其中X通常是中性氨基酸。
使用方法
儲(chǔ)存液的配制,用于細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)實(shí)驗(yàn):按照基本信息表格中溶解性進(jìn)行溶解,如用于細(xì)胞實(shí)驗(yàn),請(qǐng)配制成液體之后用0.22μm過濾后再加入細(xì)胞。
儲(chǔ)存液的保存:建議現(xiàn)配現(xiàn)用,液體不是很穩(wěn)定;也可分裝成單次用量,2年穩(wěn)定。避免反復(fù)凍融。
使用濃度:用于組織和細(xì)胞分散的常用濃度為:0.5~2.5mg/mL,用于軟骨消化的常用濃度為1~2mg/mL,需要根據(jù)特定的實(shí)驗(yàn)條件或者參考相應(yīng)的文獻(xiàn)資料確定所需的最佳工作濃度。
組織分離
(1)使用無(wú)菌手術(shù)刀或剪刀將組織切成3~4mm大小的組織塊;
(2)利用含Ca2+、Mg2+的Hank’s平衡鹽溶液(HBSS)洗滌組織塊數(shù)次;
(3)加入足量的含Ca2+、Mg2+的HBSS,使其浸沒組織塊,并加入膠原酶至需要工作濃度;
(4)于37℃孵育4~18h。消化時(shí)使用水平搖床以及用3mM的CaCl2補(bǔ)充消化可以提高消化效率。
(5)已分散開的細(xì)胞可使用不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩篩得,收集備用。未完全解離的組織另外添加適量的新鮮膠原酶工作液于37℃繼續(xù)孵育;
(6)利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細(xì)胞數(shù)次;
(7)細(xì)胞培養(yǎng)液重懸上述細(xì)胞,利用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)器或其他方法計(jì)算活細(xì)胞密度。
(8)于細(xì)胞培養(yǎng)皿上利用合適細(xì)胞培養(yǎng)基接種細(xì)胞。 |